Turinys
- Kas yra genotipas ir fenotipas?
- ŽIV genotipų paaiškinimas
- ŽIV fenotipų paaiškinimas
- Kada atliekamas genetinio atsparumo testas?
Jei gydymas nesėkmingas, norint nuslopinti šią naują atsparaus viruso populiaciją, reikia pasirinkti alternatyvius vaistų derinius. Genetinio atsparumo bandymai padeda tai palengvinti nustatant atsparių mutacijų tipus žmogaus „virusiniame telkinyje“, tuo pačiu įsitikinant, kokie tie virusai yra jautrūs galimiems antiretrovirusiniams agentams.
Genetinio atsparumo ŽIV tyrimams naudojamos dvi pagrindinės priemonės: ŽIV genotipinis tyrimas ir ŽIV fenotipinis tyrimas.
Kas yra genotipas ir fenotipas?
Pagal apibrėžimą genotipas yra tiesiog genetinė organizmo struktūra, o fenotipas yra pastebimos to organizmo savybės ar bruožai.
Genotipiniai tyrimai (arba genotipų nustatymas) veikia identifikuodami paveldimas instrukcijas ląstelės genetiniame kode arba DNR. Fenotipiniai tyrimai (arba fenotipai) patvirtina tų instrukcijų išraišką veikiant skirtingoms aplinkos sąlygoms.
Nors ryšys tarp genotipo ir fenotipo nėra absoliutus, genotipai dažnai gali nuspėti fenotipą, ypač kai genetinio kodo pokyčiai lemia numatomus požymių ar savybių pokyčius, kaip ir besivystančio atsparumo vaistams atveju.
Kita vertus, fenotipai patvirtina „čia ir dabar“. Jo tikslas yra įvertinti organizmo reakciją į specifinius aplinkos slėgio pokyčius, pvz., Kai ŽIV veikia skirtingi vaistai ir (arba) vaistų koncentracija.
ŽIV genotipų paaiškinimas
ŽIV genotipų nustatymas paprastai yra labiausiai paplitusi atsparumo tyrimams naudojama technologija. Tyrimo tikslas yra nustatyti specifines genetines mutacijas gag-pol viruso regionas “ genomas (arba genetinis kodas). Tai yra sritis, kurioje atvirkštinės transkriptazės, proteazės ir integrazės fermentai - daugelio antiretrovirusinių vaistų taikiniai - yra koduojami DNR grandinėje.
Pirmiausia amplifikuodami ŽIV genomą naudodami polimerazės grandininės reakcijos (PGR) technologiją, laboratorijos specialistai gali sekuoti (arba „susieti“) viruso genetiką naudodami įvairias mutacijų aptikimo technologijas.
Šias mutacijas (arba mutacijų kaupimąsi) aiškina technikai, analizuojantys ryšį tarp nustatytų mutacijų ir numatomo viruso jautrumo skirtingiems antiretrovirusiniams vaistams. Internetinės duomenų bazės gali padėti palyginant tyrimo seką su „laukinio tipo“ viruso prototipu (t. Y. ŽIV, kuriame nėra atsparių mutacijų).
Šių testų aiškinimas naudojamas siekiant nustatyti jautrumą vaistams, o didesnis pagrindinių mutacijų skaičius lemia aukštesnį atsparumo vaistams lygį.
ŽIV fenotipų paaiškinimas
ŽIV fenotipų nustatymas vertina žmogaus ŽIV augimą esant vaistui, tada lyginamas su kontrolinio, laukinio tipo viruso augimu tame pačiame vaiste.
Kaip ir atliekant genotipinius tyrimus, fenotipiniai tyrimai sustiprina ŽIV genomo gag-pol sritį. Tada ši genetinio kodo dalis „įskiepijama“ į laukinio tipo kloną naudojant rekombinantinės DNR technologijos. Gautas rekombinantinis virusas naudojamas užkrėsti žinduolių ląsteles in vitro (laboratorijoje).
Tada viruso mėginys veikiamas didėjančių skirtingų antiretrovirusinių vaistų koncentracijomis, kol pasiekiama 50% ir 90% viruso slopinimas. Tada koncentracijos palyginamos su kontrolinio laukinio tipo mėginio rezultatais.
Santykiniai „kartus“ pokyčiai pateikia vertės diapazoną, pagal kurį nustatomas jautrumas vaistams. Keturiskart didesnis pokytis reiškia, kad norint pasiekti viruso slopinimą, reikėjo keturis kartus didesnio vaisto kiekio nei laukinio tipo. Kuo didesnė kartotinė vertė, tuo virusas yra mažiau jautrus konkrečiam vaistui.
Tada šios vertės priskiriamos žemesniems ir viršutiniams klinikiniams intervalams, o viršutinės vertės suteikia didesnį atsparumo vaistams lygį.
Kada atliekamas genetinio atsparumo testas?
JAV genetinio atsparumo tyrimai tradiciškai atliekami negydžiusiems pacientams, siekiant nustatyti, ar jie turi „įgytą“ atsparumą vaistams. Tyrimai JAV rodo, kad nuo 6% iki 16% perduoto viruso bus atsparūs bent vienam antiretrovirusiniam vaistui, o beveik 5% bus atsparūs daugiau nei vienai vaistų grupei.
Genetinio atsparumo tyrimai taip pat naudojami, kai įtariamas gydomiems asmenims atsparumas vaistams. Tyrimas atliekamas pacientui taikant nesėkmingą režimą arba per keturias savaites nuo gydymo nutraukimo, jei viruso kiekis viršija 500 kopijų / ml. Paprastai tokiais atvejais pirmenybė teikiama genotipo tyrimams, nes jie kainuoja pigiau, jų greitis yra trumpesnis ir jie siūlo didesnį jautrumą laukinio tipo ir atsparaus viruso mišiniams aptikti.
Fenotipinio ir genotipinio tyrimo derinys paprastai yra pirmenybė asmenims, turintiems kompleksinį atsparumą daugeliui vaistų, ypač tiems, kurie veikiami proteazės inhibitoriais.