Turinys
Polimerazės grandininės reakcijos (PGR) analizė yra laboratorijos metodas. PGR testavimo tikslas yra surasti nedidelį DNR kiekį mėginyje, naudojant procesą, žinomą kaip stiprinimas. PGR amplifikacijos metu dominanti DNR kopijuojama pakartotinai, kol jos pakanka analizei ir aptikimui. Pavyzdžiui, PGR galima nustatyti nedidelį DNR kiekį iš organizmų, sukeliančių gonorėją ar chlamidijas, esančių šlapimo mėginyje.Kaip veikia PGR?
Pirmasis PGR žingsnis yra sukurti gruntai. Tai trumpos DNR sekos, sutampančios su DNR mėginio, kurį bandote aptikti, galais. Jie yra gudrybė surasti, sustiprinti ir aptikti tam tikrą DNR dalį. Ta DNR dalis gali būti naudojama patogenui nustatyti. Jis taip pat gali būti naudojamas tokiems dalykams kaip nustatyti atsparumo antibiotikams genus.
Gavę pradmenis, kitas PGR etapas yra mėginio pašildymas, kad dvigubos grandinės DNR atsiskirtų į dvi vijas. Tai vadinama denatūracija. Tada gruntaiyra sujungiami su mėginio DNR. Po to - DNR polimerazė yra naudojamas DNR replikacijai pradmens vietoje pradėti. Galiausiai DNR pašildoma, kad dar kartą būtų atskiriamos sruogos. Tuo prasideda visas PGR procesas.
Mėginyje esančio dominančio DNR segmento kiekis eksponentiškai didėja su kiekvienu PGR ciklu. Pirmojo ciklo metu viena kopija tampa dviem. Tada dvi kopijos tampa keturios, paskui tampa aštuonios ir pan. Šis eksponentinis augimas reiškia, kad norint nustatyti, ar yra atitinkama DNR, paprastai reikia tik 20–40 ciklų. (Jei yra DNR, pakanka ir 20–40 ciklų, kad gautumėte pakankamą mėginį analizei).
Visi polimerazės grandininės reakcijos etapai - DNR denatūravimas, pradmenų panaudojimas ir DNR pailginimas vyksta skirtingose temperatūrose. Tai reiškia, kad po to, kai pradinis mišinys yra sujungtas, veiksmus galima kontroliuoti procesu, žinomu kaip termociklizacija. Termociklai reiškia, kad temperatūra palaikoma reikiamame lygyje pakankamai ilgai, kad galėtų įvykti kiekvienas žingsnis. Taigi PGR yra efektyvus būdas padidinti tikslinės DNR kiekį. Tiesą sakant, tai galima atlikti viename mėgintuvėlyje, mažai reikalaujant žmogaus intervencijos.
Polimerazės grandininė reakcija reiškė biologinės technikos revoliuciją, kai ji pirmą kartą buvo sukurta devintojo dešimtmečio pradžioje. PCR kūrėjas Kary Mullis už savo darbą 1993 metais pelnė Nobelio chemijos premiją.
Kodėl PGR yra svarbus STD tyrimams
Polimerazės grandininė reakcija ir susijusios technikos, pvz ligazės grandininė reakcijaįrodo, kad vis didesnė reikšmė STD tyrimams. Taip yra todėl, kad šie metodai gali tiesiogiai nustatyti nedidelį kiekį virusų DNR ar RNR mėginiuose. Norint nustatyti patogeno genetinį kodą, patogenas neturi būti gyvas, skirtingai nei bakterijų kultūra ar virusinė kultūra. Tai taip pat nereikalauja, kad infekcija būtų įvykusi pakankamai seniai, kad žmonėms būtų nustatyta aptikta antikūnų reakcija (tai, kaip infekcijos nustatomos ELISA metodu). Tai reiškia, kad PGR metodai kartais gali aptikti ligas anksčiau nei kiti tyrimai. Dar geriau, LPL gali būti aptikta, nesijaudinant, ar mėginiai gyvi, ar atliekant tyrimus tiksliai reikiamu laiku.
Geriausi STD testai namuose